褪黑素（Melatonin，MT）是一种主要由松果体在夜间释放的激素，长期以来一直与睡眠-觉醒周期的控制有关。褪黑素属于吲哚杂环类化合物，又称为松果体素、褪黑激素、褪黑色素。褪黑素合成后，储存在松果体内，交感神经兴奋支配松果体细胞释放褪黑素。褪黑素的分泌具有明显的昼夜节律，白天分泌受抑制，晚上分泌活跃。

Abbexa褪黑素（Melatonin，MT）ELISA试剂盒助力褪黑素研究：

试剂准备：

1） 标准：用推荐的标准稀释液量配制标准溶液，制成标准溶液。然后使用标准稀释液缓冲液，按照协议的指示对标准溶液进行串行稀释。

2） 洗涤缓冲液：按照协议的规定，用蒸馏水稀释浓缩洗涤缓冲液。

3） 检测试剂制备：计算所需工作液的总体积。用稀释剂A和稀释剂B分别在1:100稀释检测试剂A和检测试剂B。

分析程序：

1） 设置标准、测试样品和控制井。

2） 等分50µl将稀释标准液注入标准井。

3） 等分50µl标准稀释液缓冲液注入对照（零）孔。

4） 等分50µl将稀释样品注入样品孔。

5） 立即等分50µ每口井注入1升检测试剂A。37℃孵育1小时°C

6） 洗3次。

7） 等分100µ每口井注入1升检测试剂B。37℃孵育30分钟°C

8） 洗5次。

9） 等分90µ每口井的TMB基板数量。37℃孵育10-20分钟°C

10）等分50µ我要停止解决问题。

11）在450牛米处测量外径。

褪黑素（MT）ELISA试剂盒（#abx354613）检测原理：

该试剂盒基于竞争性酶联免疫吸附测定技术。抗体被预先包被在96孔板上。将标准品、测试样品和生物素结合试剂添加到孔中并孵育。生物素标记的MT与未标记的MT之间发生竞争抑制反应。然后加入HRP结合试剂，并孵育整个培养皿。在每个阶段使用洗涤缓冲液去除未结合的结合物。TMB底物用于定量HRP酶促反应。加入TMB基质后，只有含有足够MT的孔才会产生蓝色产物，然后在加入酸性停止溶液后变为黄色。黄色的强度与镀液中MT的结合量成反比。用分光光度法在450 nm的微孔板读卡器中测量OD，由此可计算MT的浓度。

结果计算：

此分析具有竞争性，因此样品中的MT浓度与测量的吸光度呈负相关。用标准浓度（y轴）和测量的平均吸光度（x轴）的对数创建一个图表。通过标准点应用zui佳拟合趋势线。样品的MT浓度可以从标准曲线中插值。

艾美捷小贴士：

仅供研究使用。范围和灵敏度可能会发生变化。随时关注zui新信息。为了获得准确结果，必须将样品浓度稀释至试剂盒的中量程。