土壤的成分包括矿物质、粘土等无机物、植物及植物的遗体、腐殖物质等土壤有机物以及在土壤中存在的微生物。

提取的难点：

从土壤中提取的DNA，是微生物、动植物遗体等的总DNA，同时，腐殖物质的性质与DNA很相似，DNA提取过程中会将腐殖等物质一起纯化，采用传统的DNA提取方法来除去腐殖物质等抑制因子是十分困难的。而这些腐殖物质会抑制聚合酶链式反应（PCR）及限制性酶切等。因而，从土壤中提取DNA，腐殖物质等抑制因子的除去干净是重中之重。某公司根据腐殖物质等特点，发明了高效的腐殖酸吸附剂，再与硅胶柱纯化的技术结合，开发出了高效土壤DNA提取试剂盒（SoilDNAKit），已为广大客户所采用，完全能够替代价格昂贵的进口产品。

原理与操作：

土壤样品加入悬浮缓冲液Buffer C1，并加入玻璃珠与zhuanli的腐殖酸吸附剂Buffer C2，涡旋使土壤充分重悬，腐殖物质充分释放，让吸附剂有效吸附腐殖酸。再加入高效的裂解液Buffer C3并涡旋在玻璃珠的摩擦作用下，裂解土壤中的所有生物包括G+细菌、酵母菌、真菌、藻类、线虫甚至真细菌的孢子、芽孢、动植物遗体等，游离DNA。之后，再加入沉淀剂Buffer C4，离心沉淀除去土壤残渣、吸附有腐殖酸的吸附剂、多糖多酚、绝大部分的色素等，获得清亮的、含有DNA的上清，上清加入异丙醇沉淀获得DNA粗品。粗品中加入ddH2O溶解后，再加入Buffer C5离心进一步除去腐殖酸等杂质，获得上清，往上清加入乙醇后转移到硅胶纯化柱中过柱吸附DNA，除去杂质。再加入漂洗液Buffer WB离心进一步除去蛋白质、腐殖酸等杂质，加入漂洗液DNA Wash Buffer除去盐分等。干燥柱子后加入灭菌去离子水后，离心获得高纯的DNA。

艾美捷土壤DNA提取试剂盒样品使用量与DNA产出数据参考：

土壤zui大上样量：250mg

处理的土壤类型：所有土壤类型

纯化柱zui大结合载量：50 ug

纯化柱-zui大液体输入体积：650 uL

10个样品的纯化时间：30 minutes

64000土壤DNA提取试剂盒测试：

用Real-time PCR来确认提取的DNA是否有高质量。使用Norgen的土壤DNA提取试剂盒（货号：64000）和Competitor M的试剂盒，从250mg粘土（含有低腐殖酸）和表层土壤（含有高腐殖酸）样品中分离出土壤DNA。使用4 µL土壤DNA（总PCR反应体积为20 µL）进行Real-time PCR，检测来自不同土壤样品的16s rDNA。与Competitor M的样品（绿线）相比，Norgen的DNA样品（红线）的较早的Ct值表明下游应用的土壤DNA质量更高。