双尾RT-qPCR技术检测microRNA的原理是什么? 点击:12 | 回复:0



amyjetamy

    
  • 精华:0帖
  • 求助:0帖
  • 帖子:25帖 | 0回
  • 年度积分:21
  • 历史总积分:108
  • 注册:2019年4月15日
发表于:2021-04-07 16:33:31
楼主

双尾RT-qPCR是什么呢?它是一种基于PCR法的miRNA定量检测试剂盒。那么,就先从传统microRNA PCR检测法的痛点说起吧~

 

传统的PCR法检测microRNA,两个常规PCR引物的总长度几乎是microRNA长度的两倍,因此不适合于做miRNA的引物。以前的技术通过使用发夹引物延伸microRNA,添加poly A尾巴或通过连接添加片段来解决这个问题,但是这会降低检测的灵敏度和特异性。此外,这些方法无法检测在3'末端修饰的microRNA,因为它会干扰延伸过程。

 

好了,说到这里,在郑重向大家介绍这款名为双尾RT-qPCR技术。它的原理如下:

与使用单个结合探针不同,双尾PCR使用两个半探针,它们分别结合到不同的microRNA片段上,这些片段通过折叠的系链连接。虽然每个半探针本身都很短无法结合到microRNA上,但当两个半探针互补时,它们会协同结合,这种结合的特异性是非常高的,因为在短半探针中错配的影响非常大。然后可以使用两个特定序列引物对形成的cDNA进行PCR扩增,用SYBR进行检测。

RT-qPCR.jpg

怎么样,有没有明白一点了,那么接下来,了解一下它的优势吧!

 

1.高灵敏度:zui多少于10个分子;

2.高特异性

适合于多种样本(血浆/血清,血液,组织等)中的miRNA检测和定量

通过折叠的系链连接的两个半探针(结合不同的microRNA片段)

动态范围广(高达9 log)

在进行单重qPCR之前,可进行双管多重RT-PCR

提供定制化服务

高灵敏度及特异性:

1)5´互补片段显著提高分析的灵敏度:

RT-qPCR-1.png

2)5´ 互补片段显著提高检测的特异性:

RT-qPCR-2.jpg

适用样本类型丰富:

microRNA-3.png

检测流程简便:

RT-qPCR-4.jpg

 

文章来源:艾美捷科技



相关主题

官方公众号

智造工程师