通过病毒载体传递基因的一个特殊挑战是病毒滴度的准确测量。传统上,腺相关病毒(adeno-associatedvirus,AAV)颗粒是通过DNA斑点印迹或类似方法测量的。这些方法非常耗时,并且存在高度的测定间变异性。对于高度纯化的病毒样本,260nm处的吸光度已用于估计病毒颗粒的总数。然而,这种方法不能用于未纯化的病毒上清液,因为它包含的其他成分会导致260nm的吸光度。通过使用仅与AAV完整颗粒反应的抗体开发了一种ELISA方法;然而,这种方法测量所有AAV颗粒,包括那些缺乏基因组DNA的颗粒。
众多高分文章引用的,适用于任何血清型的纯化AAV,以及未纯化的AAV-2和AAV-DJ型腺相关病毒(AAV)滴度检测试剂盒来助力。
艾美捷 腺相关病毒(AAV)滴度检测试剂盒组分:
1.ViraBind AAV Reagent A
2.ViraBind AAV Reagent B
3.QuickTiter AAV Capture Matrix
4.QuickTiter AAV Wash Solution (5X)
5.QuickTiter Solution C (10X)
6.CyQuant GR Dye (400X)
7.QuickTiter AAV DNA Standard
实验优势:
1.简单快捷:未纯化的上清液大约需要 4 小时,对于纯化的 AAV 大约需要 30 分钟;
2.样本适用:检测任何血清型的纯化AAV,以及未纯化的AAV-2和AAV-DJ型
3.灵敏度:可检测1X109GC/ml的AAV的细胞上清;检测5X1010GC/ml的纯化的AAV。
原理:
标曲:
部分近期发表文章:
1.Francisco, J. et al. (2021). AAV-mediated YAP expression in cardiac fibroblasts promotes inflammation and increases fibrosis. Sci Rep. 11(1):10553. doi: 10.1038/s41598-021-89989-5.
2.Kwon, O.C. et al. (2021). SGK1 inhibition in glia ameliorates pathologies and symptoms in Parkinson disease animal models. EMBO Mol Med. doi: 10.15252/emmm.202013076.
3.Lebeau, P.F. et al. (2020). The loss-of-function PCSK9Q152H variant increases ER chaperones GRP78 and GRP94 and protects against liver injury. J Clin Invest. doi: 10.1172/JCI128650.
4.Kawaguchi, Y. et al. (2020). Endoplasmic reticulum chaperone BiP/GRP78 knockdown leads to autophagy and cell death of arginine vasopressin neurons in mice. Sci Rep. 10(1):19730. doi: 10.1038/s41598-020-76839-z.
5.Rai, R. et al. (2020). Targeted gene correction of human hematopoietic stem cells for the treatment of Wiskott - Aldrich Syndrome. Nat Commun. 11(1):4034. doi: 10.1038/s41467-020-17626-2.
6.Zeng, J. et al (2020). The Zika Virus Capsid Disrupts Corticogenesis by Suppressing Dicer Activity and miRNA Biogenesis. Cell Stem Cell. S1934-5909(20)30350-7. doi: 10.1016/j.stem.2020.07.012.
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