癌症患者及动物肿瘤模型的肿瘤活检标本常常含有异质的细胞群,包括正常组织、血液和癌细胞。目前肿瘤研究的主要瓶颈还停留在“从肿瘤组织中纯化出高纯度的肿瘤细胞”。
目前实验室里主要采用显微切割技术与密度梯度离心法纯化肿瘤细胞,但这样的效果往往不是很理想,总是存在肿瘤细胞不纯、分离效率较低、分离后肿瘤细胞状态差等缺点。目前,也有采用流式细胞仪进行肿瘤细胞分离的,但是成本较高。
Cell Biolabs新型肿瘤细胞分离试剂盒,操作简便且性价比高,无需特殊的技能,也无需昂贵的仪器,轻松分离克隆性肿瘤细胞。
许多实体瘤包含正常细胞和癌细胞的异质群体。这些细胞群的分离是准确评估正常细胞与肿瘤细胞之间真正的基因型和表型差异的关键。我们的CytoSelect克隆性肿瘤细胞分离试剂盒使用专有的半固体琼脂培养基来促进实体瘤细胞形成菌落。菌落在6孔板或35mm培养皿中生长。通过大小过滤将这些菌落从单个(即正常)细胞中分离出来。来自这些菌落的活细胞可以很容易地回收用于进一步分析。
克隆性肿瘤细胞分离试剂盒实验原理:
大多数实体瘤细胞均能在软琼脂上生长并形成克隆,利用该原理,可以将少量的肿瘤细胞从大多数非恶性细胞内分离出来。该克隆性肿瘤细胞分离试剂盒首先对实体瘤进行消化获得单个细胞,然后将细胞置于半固体软琼脂中培养6-8天,待形成克隆后,使用细胞筛获得肿瘤单细胞,以达到有效分离肿瘤细胞的克隆和不能形成克隆的单细胞。另外,由于肿瘤干细胞具有相似的特征,因此该肿瘤细胞分离试剂盒除了能用于实体瘤细胞的分析,也可以应用于肿瘤干细胞的分离。
实验流程图:
实验结果图:
克隆形成、分离和重新铺板:小鼠肺肿瘤被切除、切碎和消化后,按照500,000个细胞/孔接种到琼脂基质悬浮液中。图A显示了培养7天后的克隆集落形成(红色箭头显示集落,黑色箭头显示单细胞)。图B显示获得的克隆集落(单个细胞已被去除)。图C展示了培养3天后重新铺板的克隆集落(没有预先进行胰蛋白酶消化)。图D展示了培养1天后重新铺板的克隆形成菌落(在铺板前对菌落进行胰蛋白酶消化/滴定以产生单细胞悬浮液)。
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