细胞增殖和细胞死亡间平衡的维持对多种细胞有机的发育与生命的维持至关重要，其失衡将导致各 种疾病的发生.如：人类平均每天有 6×10（10）个新细胞生成，同时又接近同等数量的成熟细胞被机体清除.在细胞增殖及细胞凋亡间存在一种配对关系，因此区分活细胞和死细胞对研究生长条件的控制和 细胞死亡过程都是十分重要的。

工作原理：

活/死细胞双染色试剂盒（绿/红），提供了一种方便的测定方法，以评估细胞的活力，它基于使用 两种探针同时测定活细胞和死细胞的方法，这些探针测量公认的细胞健康参数：质膜完整性和细胞内酯 酶活性。该试剂盒利用可渗透细胞的绿色荧光染料 LiveDye（Ex / Em = 488/530 nm）染色活细胞，并使用不可渗透细胞的红色荧光染料 NucleiDye（Ex / Em = 535/617）用来染死细胞。

产品介绍：

产品类型 细胞分析

检测方法 荧光显微镜，流式细胞术；

活细胞绿色荧光染料 LiveDye（Ex / Em = 488/530 nm）死细胞红色荧光染料 NucleiDye（Ex / Em = 535/617）

运输 冰袋运输

保存 请参阅说明书中各个组分的存储条件。

自发货之日起，在推荐温度下至少稳定 12 个月。

其它 默认使用 24 孔板进行实验

* 注意事项

1） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2） NucleiDye 是一个潜在的诱变因子，使用本试剂时应采取适当的防护措施

3） LiveDye 需要在干燥低温避光条件下储存，储存温度为-20℃。

Ø 针对哺乳动物细胞染色进行优化

Ø 可用于使用流式细胞术或荧光显微镜，快速定量细胞活力

使用方法：

*[Note] 本实验中选择的细胞为 HeLa 细胞。由于不同类型细胞的zui佳染色条件不同，LiveDye和 NucleiDye 的zui佳染色浓度会有所不同。

一．试剂准备：

A. 活细胞-绿色染料（LiveDye）：冰上避光放置。

B. 死细胞-红色染料（NucleiDye）：冰上避光放置。

C. 实验缓冲液 (10×) [Assay Buffer(10×)]：用 ddH20 稀释 10x 实验缓冲液，至 1x 实验缓冲液（工作液）。使用前预热到 37C。

D. 染色工作液：每 1 ml 的实验缓冲液（1X）中，加入 1ul 活细胞-绿色染料（LiveDye）和 1ul 死细胞-红色染料（NucleiDye），混合均匀（适用于2个样品孔，每孔0.5ml）。如有大量样品，请成            比例的扩大染色工作液配置。

二．（一）荧光显微镜：

1. 用预期的方法处理细胞，在不含诱导剂条件下孵育细胞建立阴性对照组；

2. 对于贴壁细胞，在 24 孔板的盖玻片上种植和培育细胞，在 CO2 细胞培养箱中 37°C 培养至少 24 小时。先用细胞刮刀或者胰酶-EDTA 消化细胞，之后离心收集细胞（1000 rpm，3 min）。

对于悬浮细胞，直接离心(4℃, 300g, 5 min）收集细胞。

3. 用 PBS 洗涤细胞两次，移除液体。

4. 在 24 孔板中，每个孔加入 0.5ml 染色工作液来，37℃避光孵育 15-30 min。

5. 用 PBS 洗涤细胞两次。

6. 将盖玻片覆盖到载玻片上，尽快使用适当的滤光片通过荧光显微镜分析细胞。

来源：艾美捷科技