近年来，AAT荧光探针领域陆续出现了很多优质的钙离子探针，这些为实现高通量监测钙浓度，筛选GPCR和钙离子通道药物筛选提供了有力的工具。下面一起来看看几个关于钙离子探针的常见问题吧~希望能给大家带来一些帮助！

一、内质网（ER）钙离子浓度检测荧光探针

内质网是一个复杂的、高度动态的细胞内三维膜系统，在大多数真核细胞中起着动态钙库的作用。内质网Ca2+缓冲液的特殊排列，以对Ca2+的低亲和力为特征，与SERCA泵活性相结合，使内质网Ca2+（[Ca2+]L）保持恒定∼0.1–0.8 mM（细胞钙38:303–310，2005），从而产生针对细胞溶胶的陡峭电化学梯度。内质网Ca2+通道的激活导致Ca2+释放，这有助于[Ca2+]i升高，而SERCA依赖的Ca2+摄取有助于终止胞浆Ca2+信号。

此外，连续的管腔空间可作为游离Ca2+离子（“Ca2+通道”）的行进路线，从而绕过胞浆Ca2+缓冲液，防止线粒体Ca2+摄取或Ca2+在质膜上丢失。

此外，[Ca2+]L的变化调节内质网驻留的伴侣，负责翻译后的蛋白质处理。因此，[Ca2+]L整合了各种信号事件，并在与ER-Ca2+释放/摄取相关的快速信号和主要依赖于蛋白质合成调节的持久适应性反应之间建立了联系。

那么，关于内质网钙离子检测，Cal-520N（Cat# 21146）, Calbryte 520L（Cat# 20640）, Fluo-5N（Cat# 20566）和Mag-fluo4（Cat# 20401)都是可以的。

二、检测细胞中钙离子时加入丙磺舒（probenecid）的作用是什么？文献报导丙磺舒（probenecid）可能会干扰钙离子通道，比如干扰环核苷酸门控通道，有没有可以不用丙磺舒的钙离子探针？

丙磺舒（probenecid），是一种阳离子转运体抑制剂，用来降低探针进入胞内后被排除的几率，以提高胞内信号。常见的Fluo-3 、fluo-4、 Fluo-8都需要加丙磺舒，否则信号会很低。可以选择Calbryte系列，该系列无需丙磺舒（probenecid）仍会有很好的信号。

三、荧光探针的AM、盐形式、Dextran葡聚糖形式有什么区别？

AM酯形式：AM酯形式是一种可以透过细胞膜进入细胞的，不需要其他辅助工具；

盐形式：盐形式的Fluo-8不能自行穿过细胞膜，需要辅助进入细胞，如微量注射等；

Dextran葡聚糖形式：若检测孵育时间久容易发生区室化，比如钻进了内质网等亚器官内，Dextranzui大的优势就是降低了区室化作用，但是需要显微注射或其他方式才能进入细胞内。

四、样本中钙离子定量检测试剂盒

人体血液里钙离子的浓度大约在19 -10.5 mg/dL范围内，血液里钙离子浓度过低或者过高可引起低钙血症和高钙血症。Amplite 荧光法钙离子定量试剂盒（Cat#36360）可用于定量体液的钙离子浓度，可使用96孔或者384孔板经酶标仪读取数值， 不需进行样本分离直接检测，30min可完成，最低检测到0.03mM的钙离子。

五、用于植物细胞（拟南芥原生质体）的钙离子探针

常用的 Fluo-4 AM, Fluo-8 AM 以及 Calbryte 520 AM, 都适用于植物细胞，Fluo-4zui常用，若要获得更好的信噪比，其升级版本 Calbryte 520 AM更合适。

文章来源：艾美捷科技