双尾RT-qPCR是什么呢？它是一种基于PCR法的miRNA定量检测试剂盒。那么，就先从传统microRNA PCR检测法的痛点说起吧~

传统的PCR法检测microRNA，两个常规PCR引物的总长度几乎是microRNA长度的两倍，因此不适合于做miRNA的引物。以前的技术通过使用发夹引物延伸microRNA，添加poly A尾巴或通过连接添加片段来解决这个问题，但是这会降低检测的灵敏度和特异性。此外，这些方法无法检测在3'末端修饰的microRNA，因为它会干扰延伸过程。

好了，说到这里，在郑重向大家介绍这款名为双尾RT-qPCR技术。它的原理如下：

与使用单个结合探针不同，双尾PCR使用两个半探针，它们分别结合到不同的microRNA片段上，这些片段通过折叠的系链连接。虽然每个半探针本身都很短, 无法结合到microRNA上，但当两个半探针互补时，它们会协同结合，这种结合的特异性是非常高的，因为在短半探针中错配的影响非常大。然后可以使用两个特定序列引物对形成的cDNA进行PCR扩增，用SYBR进行检测。

怎么样，有没有明白一点了，那么接下来，了解一下它的优势吧！

1.高灵敏度：zui多少于10个分子；

2.高特异性

适合于多种样本（血浆/血清，血液，组织等）中的miRNA检测和定量

通过折叠的系链连接的两个半探针（结合不同的microRNA片段）

动态范围广（高达9 log）

在进行单重qPCR之前，可进行双管多重RT-PCR

提供定制化服务

高灵敏度及特异性：

1）5´互补片段显著提高分析的灵敏度：

2）5´ 互补片段显著提高检测的特异性：

适用样本类型丰富：

检测流程简便：

文章来源：艾美捷科技