超滤膜配合紫外线产生之超纯水与DEPC之超纯水比较

使用 RNase free 的超纯水,进行 in situ hybridization(图１)反应,并与 DEPC(Diethylpyrocarbonate)处理水进行比较,(所谓 DEPC处理,是传统的 RNase free 水的制作方法。这是在纯水中加入 0.1% (v/v) 的 DEPC,经数小时的搅拌使 RNase 失去活性,之後再进一步以高压灭菌釜来分解残留的 DEPC)分析结果後发现,无论以任何水质所得结果皆相同,也就是具有相同的效果。

由於 DEPC 处理水的制作过程耗费时间,使得进行 in situ hybridization 非常麻烦。而且,报告指出 DEPC 具有致癌性,应避免使用。而 DEPC 属於强化学修饰剂,高压灭菌釜 (autoclave) 处理仍有残留的可能,这会对其它的酵素活性产生抑制,以及 RNA 造成修饰作用。

在此,为了了解 RNA 样品在 DEPC 水中的安定性,我们将市售的 Total RNA 分别溶解於超纯水(经超滤膜与紫外线照射)与 DEPC 水中,於 37℃静置 1小时与 24小时後比较其安定性。结果显示,24小时後, DEPC 水中的 RNA 已完全被分解,而超纯水中的 RNA 只受到些微纯水机的分解。这种同时具有超滤膜与紫外线灯照射的超纯水系统所提供的 RNase free 水可以同时兼具实验者的安全性、作业效率与实验的准确性。

近来,在生物学与分子生物学领域中经常使用 LC/MS、HPLC 与DNA晶片等仪器进行分析检测,因此需要使用不含有内毒素、RNase 且低有机物含量的超纯水。而 DEPC 处理水虽然不含有 RNase,但含有许多 DEPC 分解後所产生的离子与有机物质,在使用上受到很大的限制。因此,使用具有超滤膜与紫外灯的超纯水系统对生物实验而言是大势所趋。