常见流式抗体荧光染料介绍:
1) 藻红蛋白(phycoerythrin,PE):PE是从红藻中分离纯化获得的一种常见染料,经激光激发后发出橙黄色荧光,zui大发射波长为575 nm。PE具有吸光性能好和光量子产率高的特点,可用于标记表达水平较低的蛋白。在流式细胞术检测中,PE标记的抗体适用于所有配备488 nm氩离子激光器的流式细胞仪。
2) PE-Cy5:PE-Cy5是一种复合染料,属于藻红蛋白偶联物,在此类复合染料中,激发能量可从PE传递到Cy5上,zui大发射波长为667 nm。由于PE-Cy5与FITC、PE在光谱上重叠范围较少,荧光干扰少,因此实验中常将PE-Cy5与FITC、PE搭配使用。需注意,PE-Cy5不适合与APC搭配使用,两者荧光重叠大。
3)PE-Cy5.5:PE-Cy5.5也是一种复合染料,能量从PE传递到Cy5.5上,zui大发射波长为694 nm。同PE-Cy5不一样,PE-Cy5.5与FITC、PE、APC间荧光干扰小,可搭配使用,且其荧光强度要优于PE-Cy5。
4) PE-Cy7:复合染料,zui大发射波长为785 nm。PE-Cy7与FITC无光谱重叠,与APC重叠也较少,因此其可与FITC、PE、APC搭配使用。在实验中需要注意,PE-Cy7的光淬灭性很强,需要避光环境。
5) PerCP-Cy5.5:复合染料,zui大发射波长为695 nm。PerCP-Cy5.5光量子产率高,可用于表达水平较低物质的检测,与PerCP-Cy5.5相反,PerCP的光量子产率较低,适用于表达水平较高物质的检测,在双激光管仪器上与APC共同检测时,需要做补偿调节,但比PerCP补偿少。
6) PI/7-AAD:碘化丙啶(propidium iodide,PI)和7-AAD(7-amino-actinomycin D)的zui大发射波长分别为617 nm和647 nm,是常见的荧光染料,常用于细胞凋亡检测,可用于鉴别死、活细胞。在大部分流式细胞仪上,PI在FL2或FL3通道检测,7-AAD在FL3通道检测。7-AAD同PI 有着相似的荧光特性,但其发射波谱较PI窄,对其他检测通道的干扰更小,在多色荧光分析中是PI的zui佳替代品。
7) 别藻青蛋白(allophycocyanin,APC):APCzui大发射波长为660 nm,其标记的抗体适用于所有配备氦氖激光器的流式细胞仪,检测通道一般是FL4通道。FITC、PE和APC搭配是经典3色搭配。
8) Cy5:Cy5属于小分子染料,其zui大发射波长为670 nm,其标记的抗体适用于所有配备633 nm氩离子激光器的流式细胞仪,检测通道一般是FL4通道。除流式细胞术外,Cy5同样适用于传统的荧光显微镜技术。需注意的是,Cy5与单核细胞和粒细胞的非特异性结合多,实验结果容易出现假阳性。
9) 异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC):FITC是应用zui为广泛的一种荧光素,经激光激发后发出明亮的黄绿色荧光,zui大发射波长为525 nm。FITC的荧光强度受PH影响较大,常随着PH的降低而减弱,因此,在使用FITC时需格外注意溶液的酸碱度。
楼主最近还看过