聊一聊小G蛋白活性增强剂——鸟苷酸交换因子（GEF），GEF 是通过催化其目标 GTPase上的核苷酸交换来发挥作用，GEF与核苷酸结合的 GTPase 结合，这会导致结合的核苷酸被释放，从而产生不含核苷酸的GEF-GTPase 反应中间体。这种不含核苷酸的复合物随后将结合新的核苷酸，然后GEF再从GTPase 中释放出来。

由于GEFs对GDP-GTPases的亲和力高于对相应GTP-GTPases的亲和力，在正常细胞中GTP和GDP比率约为10:1，GEFs将推动从GDP-GTPases到GTP-GTPases的转换。

艾美捷GEF活性检测试剂盒是一款基于荧光法的检测GTP酶上的核苷酸转换的试剂盒，可适用于常规的96孔格式或高通量384孔格式。

GEF活性检测试剂盒包含检测所需的所有试剂：

1.Exchange Buffer

2.His标签 Cdc42蛋白

3.His标签 Rac1 蛋白

4.His标签 RhoA 蛋白

5.His标签 hDbs 蛋白（作为 Cdc42 和 RhoA 的GEF的阳性对照 ）

6.黑色384孔板

7.黑色96孔板

检测原理：该试剂盒是通过检测荧光核苷酸类似物 N-甲基邻氨基苯甲酰-GTP（mant-GTP）对 GTPase 的结合情况来检测GEF的活性的。一旦mant-GTP与 GTPase 结合， mant-GTP的荧光强度（Ex：360 nm，Em：440 nm）显著增加，通过检测游离的mant-GTP和GTPase 结合的 mant-GTP 之间的荧光值差异，即可检测样本中GEF的活性。

GEF活性检测试剂盒的主要用途和应用:

1.测定未知GEFs活性；

2.小GTPases及其相关GEFs的生化特性表征；

3.研究不同辅助因子或蛋白结构域对GEF活性的调控；

4.筛选GEFs或GTPases突变蛋白的活性和底物特异性；

5.HTS(高通量筛选)筛选鉴定GEF抑制剂。

检测结果展示：

图 1.  96 孔板中Dbs 对于Cdc42、RhoA 和 Rac1 的交换活性

图 2.384 孔板中Dbs 对于Cdc42、RhoA 和 Rac1 的交换活性