翻译后修饰(PTMs)是对蛋白质的动态、严格调节的改变,它通过调节蛋白质的结构、空间定位和互作、从而控制其功能,PTMs主要包括磷酸化、甲基化、乙酰化(Ac)、泛素化(Ub)、SUMO1或2/3等方式,但还有许多其它的,PTMs的错误调节与癌症、心力衰竭、神经和代谢性疾病等的进展有关。
蛋白质发生PTM后,会显著改变蛋白的理化及构象,从而直接改变蛋白的结合能力与功能。因此,即使蛋白的表达水平没有改变,但如果翻译后修饰的状态发生改变,蛋白的功能也会显著变化。zui终,PTM实现了蛋白质功能的指数级扩增。
PTM对蛋白功能影响是多样性的,表现在以下三个方面:(1)同一蛋白质,即使只发生一种类型的修饰,也会赋予其多种功能;(2)同一个蛋白的同一种翻译后修饰,如果发生在不同的氨基酸上,其功能也不同;(3)同一蛋白还可能具有不同的修饰,其功能和参与的生物过程就更为复杂。下图以intermediate filament protein(IF蛋白)为例:
NatureReviews Molecular Cell Biology 15, 163–177 (2014)
蛋白修饰及功能的多样性是维持机体复杂精准调控的基础,但同时也给研究PTM的科研人员的研究造成了很多的困扰,为什么蛋白质翻译后修饰的鉴定难度要远远高于未发生修饰的蛋白质的鉴定了,主要有以下几点:
1.发生翻译后修饰的蛋白质样本量相对较少
2.发生修饰时形成的共价键非常不稳定,且处于动态变化中
3.修饰与未修饰的蛋白及多种修饰形式的蛋白常混合存在
Signal-Seeker™ kit用于分析各种蛋白翻译后修饰的情况:如赖氨酸乙酰化、泛素化、SUMO化、磷酸化等修饰的鉴定及各种修饰的上调下调表达。使用亲和磁珠从任何给定的细胞或组织裂解液中提取并富集修饰蛋白。然后通过标准的Western blot程序分析浓缩蛋白群,zui终用户使用自身的抗体检测所需的修饰蛋白。
Signal-Seeker™ kit应用实例:
Signal-Seeker™试剂盒研究Rac1蛋白的单泛素化和多元泛素化
文章来源:艾美捷科技
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