奥林巴斯激光共聚焦显微镜在长时间成像时需要注意以下几点：

1. 光毒性与光漂白

长时间成像过程中，激光的高强度照明可能导致活细胞的光毒性或固定标本的光漂白现象。为减少光毒性，需在成像清晰的前提下，尽量降低激光强度，并适当提高增益。同时，应避免长时间连续曝光，可根据需要调整拍摄间隔。

2. 环境稳定性

活细胞成像时，需要稳定的温控环境。应提前打开温控设备，确保温度、二氧化碳浓度和湿度等条件符合细胞生长要求。此外，长时间成像过程中应避免外界干扰，如震动、气流等。

3. 自动对焦与焦点漂移

长时间成像可能导致焦点漂移，因此需要结合自动对焦功能。可以选择“Intensity”或“Reflex”对焦模式，根据实验需求设置合适的自动对焦频率。此外，使用Definite Focus等硬件辅助对焦策略，也可以有效稳定焦距。

4. 样品保护

在长时间成像前，应确保样品的制备符合标准，避免标本过于靠近载玻片边缘。对于活细胞成像，可在培养基中添加抗氧化剂以减少光毒性。成像结束后，应评估活标本的生存能力。

5. 仪器维护与操作

长时间成像过程中，要避免频繁移动载物台，以免超出其最大移动范围。同时，注意保护物镜和样品夹，避免因操作不当造成损坏。在成像结束后，应关闭荧光光源，清理仪器并做好记录。