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质粒DNA纯化和内毒素去除方案
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amyjetamy 个人主页 给TA发消息 加TA为好友 发表于:2020-04-13 16:46:06 楼主

质粒是在染色体或核区之外能够自主复制的双链闭合环状DNA分子,以超螺旋状态存在,几乎完全裸露,主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中。质粒具有自主复制和转录能力,能在子代细胞中保持恒定的拷贝数,并表达所携带的遗传信息。

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质粒DNA广泛应用于基因工程、生物医学的研究以及生物产品的开发和应用。质粒DNA纯化是其应用的关键步骤,直接影响到转化、测序、PCR、酶切和转染等下游实验。一般质粒DNA约为2~20kb,初步纯化的质粒DNA构型分为超螺旋、开口环状及线性3种,其中超螺旋结构的质粒DNA转化和表达效率最高。质粒DNA安全性好、毒性低和免疫原性较低、便于分离和提取,在DNA重组技术、转基因方面有广泛应用。


内毒素又称脂多糖,是革兰阴性菌外部细胞壁的主要成分。脂多糖由疏水的脂质A部分、核心寡糖和杂多糖链及菌株特异性O抗原组成,其中脂质A部分是分子内毒素活性的原因。尽管脂质A不会直接伤害任何组织,但人类和动物的免疫细胞都将其视为存在细菌的指示剂。

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在质粒DNA制备的菌体裂解过程中,内毒素分子被释放到溶菌液中。由于内毒素常形成囊状结构,其分子量、电荷性和疏水性都与质粒DNA相似,常用的纯化方法很难将内毒素与质粒DNA分开。内毒素会降低原代细胞和敏感培养细胞的转染效率,干扰免疫细胞的体外转染。内毒素还会导致机体发热、低血压、呼吸窘迫、血管内凝血及内毒素性休克综合症,内毒素可通过激活TLR4刺激炎症因子IL-1、IL-6、IL-10及TNF-x的合成。国家药监局规定,DNA疫苗制品中内毒素含量不得高于0.01EU/ug,个人用剂量不超过20EU。

一.质粒DNA提取相关试剂盒
质粒提取试剂盒(小提),NGB-13300
质粒提取试剂盒(大提),NGB-46500
BAC DNA提取试剂盒(小提),NGB-18050

二.从纯化DNA中快速去除内毒素相关试剂盒
内毒素去除DNA提取试剂盒(小提),NGB-22700

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